_{血藥濃度檢測(cè)的三大技術(shù)方法}

血藥濃度系指藥物吸收后在血漿內(nèi)的總濃度，包括與血漿蛋白結(jié)合的或在血漿游離的藥物，有時(shí)也可泛指藥物在全血中的濃度。藥物作用的強(qiáng)度與藥物在血漿中的濃度成正比，藥物在體內(nèi)的濃度隨著時(shí)間而變化。目前監(jiān)測(cè)方法主要是液相色譜法。

一、臨床的作用與意義

臨床實(shí)踐中常常發(fā)現(xiàn)這樣一種現(xiàn)象，同樣劑量的藥物，用于患同種疾病的不同病人，其療效往往相差很大，有的表現(xiàn)為yao到病除，恰到好處；有的療效一般，病況稍見(jiàn)好轉(zhuǎn)；而有的卻療效不好。其毒副作用表現(xiàn)也不一樣，有的幾乎*或輕微；有的卻嚴(yán)重中毒。這是因?yàn)榇嬖谥鴤€(gè)體差異，如：年齡、性別、機(jī)體狀況、遺傳、種族等不同差異。例如，用苯妥英鈉治療驚厥和心律失常，其適治療劑量在不同的人身上變化很大。用常用量治療時(shí)，其血藥濃度變動(dòng)較大，有的人低到只有2毫克/升，根本無(wú)療效;有的人卻高達(dá)50毫克/升，病人嚴(yán)重中毒。

為了做到合理用藥，科學(xué)家們做了大量實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)這樣一個(gè)有意義的現(xiàn)象：不同的人，其有效的藥物劑量變動(dòng)很大，但是其安全有效的血藥濃度變動(dòng)卻較小。一般不過(guò)1倍左右。當(dāng)血藥濃度大于安全有效范圍，其毒副作用和表現(xiàn)及其程度在不同病人身上變動(dòng)也較小。再舉苯妥英鈉的例子，該藥的安全有效血濃度范圍在幾乎所有病人均為10～20毫克/升。同樣當(dāng)苯妥英鈉的血濃度超過(guò)安全范圍，幾乎所有病人都出現(xiàn)中毒反應(yīng)。當(dāng)血藥濃度為20～30毫克/升時(shí)，病人則出現(xiàn)精神異?，F(xiàn)象。

對(duì)那些有效濃度與中毒血濃度比較接近的藥物（如洋地黃類(lèi)），以及對(duì)那些長(zhǎng)期用藥或合并用藥的病人，為防止藥物在體內(nèi)濃度過(guò)高而產(chǎn)生毒副作用，應(yīng)該經(jīng)常測(cè)定血藥濃度。

如今，一些有條件的醫(yī)院對(duì)病人除掌握藥物的劑量和給藥的次數(shù)以外，還常常測(cè)定血藥濃度，以便指導(dǎo)臨床選擇適合不同個(gè)體的*治療方案和zui合適的治療劑量。

二、監(jiān)測(cè)方法

目前血藥濃度監(jiān)測(cè)的方法雖然很多，但常用的有光譜法、色譜法、免疫法三大類(lèi) 。

1.光譜法

該類(lèi)方法有比色法、紫外-可見(jiàn)分光光度法、熒光法等。這類(lèi)方法靈敏度比較低，只能監(jiān)測(cè)體液中藥物質(zhì)量濃度在1.0μg·L-1以上的藥物，并且代謝物或結(jié)構(gòu)相近化合物對(duì)監(jiān)測(cè)的干擾較大。在所查文獻(xiàn)中，采用雙波長(zhǎng)紫外分光光度法監(jiān)測(cè)血中氨茶堿濃度的小檢測(cè)限為0.5μg·mL-1，苯妥英鈉的低檢測(cè)限為5μg·mL-1。盡管采用差示分光光度法、導(dǎo)數(shù)分光光度法等來(lái)提高方法的專(zhuān)一性，減少了雜質(zhì)的干擾，但并不能提高該類(lèi)檢測(cè)方法的靈敏度。另外，應(yīng)用這類(lèi)方法所需樣品量大，尤其象差示分光光度法所需樣品量更大。以上缺點(diǎn)限制了該類(lèi)方法在血藥濃度監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用。尤其近年來(lái)色譜技術(shù)的發(fā)展，使得光譜法因其靈敏度、特異性等局限而使得其應(yīng)用逐漸減少。但對(duì)于藥物濃度較高的體液樣品或樣品量較大的樣品，該類(lèi)方法仍是經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)便、快捷的監(jiān)測(cè)方法。該方法目前已很少使用了。

2.色譜法

色譜法目前是發(fā)展快、適用性zui強(qiáng)的一種方法，發(fā)展前途的方法。這類(lèi)方法較光譜法大的優(yōu)勢(shì)就是它不僅具有*的定量作用，更具有一次分離多種樣品的作用，加之這種方法靈敏度高，能夠測(cè)到的藥物質(zhì)量濃度可達(dá)0.001～1μg·mL-1，尤其是近年來(lái)質(zhì)譜的發(fā)展使得監(jiān)測(cè)范圍更加擴(kuò)展，達(dá)到1.0×10-9～1.0×-6μg·mL-1甚至更低。

液相色譜(HPLC)法

HPLC法是目前臨床上用于監(jiān)測(cè)血藥濃度常用、有前景的方法，在所查文獻(xiàn)中，采用HPLC法監(jiān)測(cè)抗癲癇藥物的血藥濃度在所有方法中達(dá)到80%以上。這種方法檢測(cè)靈敏度、精密度高，專(zhuān)一性強(qiáng)。并且HPLC法應(yīng)用范圍廣，可用于藥物研究的很多領(lǐng)域，目前已越來(lái)越普及，但這種方法對(duì)樣品的前處理要求非常高，主要是因?yàn)樯V柱做為分離、分析樣品的重要載體，對(duì)進(jìn)行分析的樣品純凈度要求非常高，大分子蛋白質(zhì)及其他大分子物質(zhì)必須處理*，以zui大程度地減少對(duì)分析柱的柱效的影響，延長(zhǎng)色譜柱的使用時(shí)間。

HPLC操作費(fèi)時(shí)，費(fèi)用相對(duì)較高。目前針對(duì)色譜及光譜分析中樣品處理繁瑣的難題，已有色譜工作人員成功開(kāi)發(fā)出了在線(xiàn)凈化富集生物體液的填料柱，在進(jìn)行樣品監(jiān)測(cè)時(shí)無(wú)需預(yù)處理，蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)經(jīng)洗脫而不被保留，而小分子物質(zhì)可自由出入于固定相的疏水部分而得到分析。這一方法省時(shí)省力，近年來(lái)國(guó)內(nèi)外在HPLC系統(tǒng)中已廣泛采用SPE柱從而使得體液分析方法大為簡(jiǎn)化，但這種處理增加了樣品監(jiān)測(cè)的成本。液-質(zhì)聯(lián)用技術(shù)的發(fā)展為樣品分析提供了廣闊的空間，質(zhì)譜的聯(lián)用為色譜的進(jìn)一步發(fā)展提供了更為靈敏、準(zhǔn)確的技術(shù)支持，在很大程度上擴(kuò)展了液相色譜的應(yīng)用范圍，如監(jiān)測(cè)血清中替米沙坦的濃度時(shí)，單用液相色譜法監(jiān)測(cè)時(shí)，低檢測(cè)限為20μg·L-1，但當(dāng)應(yīng)用液-質(zhì)聯(lián)用進(jìn)行監(jiān)測(cè)時(shí)，可將靈敏度提高到0.5μg·L-1。

3.免疫法

目前采用免疫法監(jiān)測(cè)藥物濃度主要是利用蛋白競(jìng)爭(zhēng)的原理進(jìn)行監(jiān)測(cè)的。目前放射免疫法，酶免疫法、熒光免疫法是較常用于血藥濃度監(jiān)測(cè)的方法，國(guó)外監(jiān)測(cè)血藥濃度多以熒光偏振免疫法(FPIA法)、均相酶免疫法(EMIT)為主，這類(lèi)方法樣品處理簡(jiǎn)單，獲取結(jié)果時(shí)間較短，已成為臨床用于評(píng)判療效的一個(gè)重要依據(jù)。該類(lèi)儀器多由國(guó)外研發(fā)，價(jià)格較貴，且僅局限于其研發(fā)后所能監(jiān)測(cè)的藥物。但該類(lèi)儀器仍因其獲取結(jié)果快速、樣品處理簡(jiǎn)單、靈敏度高而受到臨床的重視。目前也不是主要使用方法了。